制作凝胶时需要注意哪些细节？

准确称量：精确称取琼脂糖或聚丙烯酰胺等凝胶原料，以及缓冲液、添加剂等试剂，确保试剂用量准确，以保证凝胶的浓度和性能符合实验要求。

检查试剂质量：使用前检查试剂的外观、保质期等，如琼脂糖应无结块、变色等现象，避免使用变质或受污染的试剂，以免影响凝胶的凝固和电泳效果。

充分溶解：将琼脂糖或聚丙烯酰胺加入到适量的缓冲液中，加热搅拌使其充分溶解。加热过程中要不断搅拌，防止局部过热导致试剂烧焦或溶液暴沸，确保凝胶溶液均匀一致。

避免过度加热：溶解琼脂糖时，加热至溶液澄清透明即可，过度加热可能会破坏琼脂糖的结构，影响凝胶的凝固性能和分辨率。

添加添加剂：如需添加溴化乙锭（EB）等染色剂或其他添加剂，应在凝胶溶液冷却至适当温度后再加入，并充分混匀，避免因加入过早导致染色剂失效或因搅拌不匀造成染色不均。

清洁干燥：使用前将电泳槽和梳子等模具洗净并擦干，避免残留的杂质或水分影响凝胶的凝固和与模具的贴合度。

正确安装：将模具组装好，确保密封良好，防止凝胶溶液泄漏。对于一些可拆卸的模具，要注意各部件的安装顺序和紧密程度。

放置梳子：将梳子垂直插入模具的相应位置，确保梳子的齿与模具底部保持适当的距离，一般为 1 - 2 mm，以形成合适深度的加样孔。同时，要保证梳子放置水平，避免加样孔出现倾斜或大小不一的情况。

控制温度：将冷却至约 50 - 60℃的凝胶溶液缓慢倒入模具中。温度过高可能会烫伤手指，且会使模具变形；温度过低则凝胶可能在倒出前就开始凝固，导致灌注不均匀。

避免气泡：倾倒凝胶溶液时，应沿着模具的一侧缓慢倒入，尽量避免产生气泡。如果有气泡产生，可以用玻璃棒或移液器轻轻将其赶出，以免影响凝胶的质量和电泳结果。

一次灌注完成：尽量一次性将凝胶溶液灌注到模具中，避免多次添加导致凝胶分层或不均匀。如果需要制作较厚的凝胶，可以分多次灌注，但每次灌注的时间间隔不宜过长，以免先灌注的部分凝固。

自然冷却：让凝胶在室温下自然冷却凝固，不要人为加速冷却过程，如放入冰箱或用风扇吹，否则可能导致凝胶收缩不均匀，产生应力，影响电泳时的分离效果。

避免震动：在凝胶凝固过程中，要保持模具静止，避免震动或移动，以免破坏凝胶的结构，导致加样孔变形或凝胶出现裂缝。

检查凝固情况：一般凝胶在室温下放置 30 - 60 分钟即可凝固。可以通过观察凝胶表面是否平整、透明，以及用手指轻轻触摸凝胶边缘是否有粘性来判断凝胶是否凝固。